EphB6 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-420202-LAC

O gene murino *Ephb6* codifica o EphB6, um membro atípico da família de receptores tirosina-quinase Eph, com atividade catalítica prejudicada, que modula a comunicação célula–célula dependente de ephrin-B. Por meio de interações com outros receptores Eph e ligantes ephrin, o EphB6 contribui para a sinalização dependente de contato que influencia a remodelação do citoesqueleto, a adesão e a migração, com efeitos a jusante em vias como a sinalização de GTPases da família Rho e a dinâmica de MAPK/ERK. *Ephb6* é estudado em contextos que incluem a ativação de células imunes e a organização epitelial, nos quais alterações na sinalização Eph/ephrin podem remodelar a arquitetura tecidual e microambientes inflamatórios. A desregulação da sinalização associada ao EphB6 tem sido relacionada a mudanças no comportamento de células tumorais e no potencial metastático em modelos experimentais, sustentando sua relevância para estudos mecanísticos de fenótipos celulares associados a doenças.

As Partículas de Ativação Lentivirais EphB6 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Ephb6 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais EphB6 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Ephb6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de EphB6. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Ephb6 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.