Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Epac Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401807-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- EpacO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Epac (h) e o Plasmídeo Double Nickase Epac (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para RAPGEF3. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Epac Anticorpo (A-5): sc-28366
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Epac Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-401807-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Epac Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-401807-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O RAPGEF3 humano codifica a Epac (proteína de troca diretamente ativada por cAMP), um fator de troca de nucleotídeos de guanina que ativa preferencialmente Rap1 e Rap2 para acoplar sinais de cAMP a respostas dependentes de pequenas GTPases. A Epac regula a adesão mediada por integrinas, a função de barreira endotelial, o tráfego vesicular e a remodelação de junções celulares, integrando entradas da sinalização por GPCR à dinâmica do citoesqueleto e da membrana. Por meio do controle, dirigido por Rap, de nós de sinalização relacionados a MAPK e PI3K, o RAPGEF3 influencia a proliferação, a migração e a secreção em múltiplos tipos celulares. A desregulação da sinalização cAMP–Epac–Rap tem sido implicada em fenótipos cardiovasculares e metabólicos e é estudada em contextos que incluem inflamação, fibrose e alterações associadas ao câncer na adesão e na invasividade.
Epac O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus RAPGEF3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de RAPGEF3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função RAPGEF3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com RAPGEF3 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.