Epac CRISPR/Cas9 KOプラスミド (r): sc-437373

概要

Epac（Exchange Protein Directly Activated by cAMP；RAPGEF3/RAPGEF4ファミリー）は、cAMPに応答するグアニンヌクレオチド交換因子（GEF）であり、PKAとは独立にRap1およびRap2を活性化します。Rap GTPaseシグナル伝達を介して、Epacはインテグリン依存的な接着、細胞骨格の再構築、小胞輸送、ならびに内皮バリア機能を調節し、細胞移動や細胞間接着（ジャンクション）の安定性に影響を与えます。さらに、Epac依存性のcAMP経路はMAPK/ERKおよびPI3K-AKTシグナルとも交差し、炎症応答や細胞ストレスシグナルを調節します。Epac-Rapシグナルの破綻は、血管透過性の変化や神経興奮性の変調など、心血管系および神経生物学的プロセスに関与することが示唆されており、ラットの疾患関連モデルにおける機序解明の標的としての有用性を支持しています。

Epac CRISPR/Cas9 KOプラスミド（r）は、rat細胞株における遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Epacタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Epacシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Epacの機能に不可欠なエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Epac CRISPR/Cas9 KOプラスミド（r）およびEpac CRISPR/Cas9 KOプラスミド（r2）によってコードされるgRNAは、遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Epac HDRプラスミド（r）および Epac HDRプラスミド（r2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定の標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。