eotaxin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422835
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- eotaxin El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico eotaxin, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: eotaxin Anticuerpo (C-3): sc-373767
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
eotaxin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422835 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen Ccl11 de ratón codifica la eotaxina, una quimiocina CC que impulsa el reclutamiento selectivo de eosinófilos al unirse a CCR3 y modular el tráfico de leucocitos en tejidos inflamados. La producción de eotaxina por células epiteliales, fibroblastos y células inmunitarias promueve la quimiotaxis, la adhesión y la infiltración tisular, integrándose con redes de citocinas como la señalización de IL-4/IL-13 y con programas inflamatorios regulados aguas abajo por MAPK y NF-κB. Ccl11 se estudia ampliamente en modelos de inflamación alérgica de las vías respiratorias, dermatitis atópica e inflamación eosinofílica gastrointestinal, donde la acumulación de eosinófilos contribuye al remodelado y a la disfunción de la barrera. Más allá de la alergia, la alteración de la señalización Ccl11/eotaxina se ha vinculado a la comunicación neuroinmunitaria y a la inflamación asociada al envejecimiento, lo que la hace relevante para estudios a nivel de sistemas sobre patología impulsada por quimiocinas.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO eotaxin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ccl11 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ccl11 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ccl11 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína eotaxin.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ccl11 para la investigación de la señalización de eotaxin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Ccl11 críticos para la función de eotaxin
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ccl11 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido eotaxin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido eotaxin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ccl11. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR eotaxin (m) y el plásmido HDR eotaxin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ccl11 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ccl11 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.