Endothelin-2/EDN2/ET-2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403871-NIC

EDN2は、エンドセリン（endothelin）ファミリーに属する分泌性の血管作動性ペプチドであるエンドセリン2（ET-2）をコードします。ET-2は主にエンドセリン受容体ETA（EDNRA）およびETB（EDNRB）を介してシグナルを伝達し、平滑筋収縮、血管トーヌス、ならびに傍分泌コミュニケーションを調節します。ET-2はGタンパク質共役型のシグナル伝達を活性化し、細胞内カルシウム動態、PKC/MAPKカスケード、さらに増殖・遊走・細胞外マトリックス再構築に影響する下流の転写プログラムを制御します。EDN2の発現は生殖組織で、また低酸素や炎症下で厳密に制御されており、排卵に伴う卵胞破裂、血管新生応答、免疫細胞の動員といったプロセスとの関連が示されています。エンドセリンシグナルの破綻は、心血管リモデリング、線維化表現型、腫瘍関連微小環境の変化に関与するとされ、EDN2はGPCR駆動性経路の機序研究に有用な解析ノードとなります。

Endothelin-2/EDN2/ET-2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における EDN2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、EDN2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、EDN2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、EDN2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。