Endophilin II Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401620-NIC

SH3GL1 codifica a endofilina II, um adaptador contendo domínio SH3 que conecta a detecção de curvatura de membrana à endocitose ao interagir com parceiros ricos em prolina e módulos de ligação a lipídios durante a formação de vesículas mediada por clatrina. A endofilina II participa da reciclagem de vesículas sinápticas e da internalização de receptores, ligando o tráfego de membranas à remodelação de actina e às saídas de sinalização de receptores de fatores de crescimento e do sistema imune. Por seu papel na dinâmica da via endocítica e em redes de interações proteína–proteína, a SH3GL1 tem sido estudada em contextos nos quais o tráfego vesicular influencia a proliferação celular, a diferenciação e as respostas ao estresse. Alterações na regulação de SH3GL1 ou eventos de fusão foram associadas a fenótipos de sinalização e tráfego relevantes para malignidades hematológicas, tornando-a um alvo útil para estudos mecanísticos em biologia do câncer e na função de células imunes.

Endophilin II O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus SH3GL1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de SH3GL1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função SH3GL1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com SH3GL1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.