EN2/Engrailed 2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420172

Panoramica

Engrailed 2 (EN2) è un fattore di trascrizione homeobox che contribuisce a modellare la regione in sviluppo del mesencefalo–rombencefalo e regola la differenziazione neuronale, la guida assonale e i programmi di identità regionale nel sistema nervoso centrale del topo. Legandosi al DNA tramite il suo homeodominio, EN2 coordina reti trascrizionali a valle di gradienti di morfogeni, come la segnalazione FGF e WNT, che plasmano lo sviluppo del cervelletto e del tetto mesencefalico. Alterazioni del dosaggio di EN2 o del suo controllo regolatorio sono state associate a fenotipi neurosviluppo e a tratti comportamentali, rendendolo un nodo utile per studiare i circuiti di regolazione genica nel cervello. EN2 è inoltre utilizzato come marcatore e come punto di ingresso meccanicistico per indagare il controllo trascrizionale del destino dei progenitori neurali e la formazione dei circuiti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EN2/Engrailed 2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene En2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del En2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto En2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EN2/Engrailed 2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di En2 per lo studio della segnalazione di EN2/Engrailed 2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni En2 critici per la funzione di EN2/Engrailed 2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di En2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal EN2/Engrailed 2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal EN2/Engrailed 2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus En2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal EN2/Engrailed 2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR EN2/Engrailed 2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia En2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio En2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.