EMP-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403122-ACT

A proteína 1 da membrana epitelial (EMP1; EMP-1) é uma glicoproteína associada à membrana com quatro passagens transmembranares, implicada na diferenciação epitelial, na regulação do contacto célula–célula e na remodelação da sinalização de adesão. Em tecidos humanos, a expressão de EMP1 tem sido associada à modulação de fenótipos proliferativos e migratórios por meio de vias que convergem com a sinalização de recetores tirosina-quinase, a atividade MAPK/ERK e a organização do citoesqueleto. Alterações nos níveis de EMP1 foram reportadas em múltiplos tipos de tumores e em contextos inflamatórios, onde se associam a mudanças na invasão, em programas relacionados com EMT e em respostas do microambiente. Estas características tornam a EMP1 um alvo útil para dissecar redes de sinalização próximas da membrana, programas transcricionais adaptativos ao stress e a comutação de fenótipos em modelos celulares relevantes para a doença.

EMP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EMP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EMP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EMP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EMP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EMP-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EMP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EMP-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EMP-1 em células tumorais com expressão de EMP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.