ELOVL6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-413125-ACT

ELOVL6 (proteína 6 de elongação de ácidos graxos de cadeia muito longa) é uma elongase microssomal de ácidos graxos que catalisa, no retículo endoplasmático, a extensão de ácidos graxos saturados e monoinsaturados C12–C16 para espécies de cadeia mais longa, como o estearato (C18:0). Ao moldar o pool celular de acil-CoAs de cadeia longa, a ELOVL6 influencia a lipogênese de novo, a composição lipídica de membranas e a biossíntese subsequente de glicerolipídeos e esfingolipídeos. A atividade da ELOVL6 se cruza com redes de sinalização metabólica, incluindo programas transcricionais conduzidos por SREBP1 e respostas de estresse mediadas por lipídios que modulam a sensibilidade à insulina e a inflamação. Alterações na expressão de ELOVL6 têm sido associadas à desregulação da homeostase lipídica observada em fenótipos de doenças metabólicas, incluindo esteatose hepática, resistência à insulina relacionada à obesidade e estados de risco cardiometabólico.

ELOVL6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ELOVL6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ELOVL6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ELOVL6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ELOVL6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ELOVL6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ELOVL6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ELOVL6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ELOVL6 em células tumorais com expressão de ELOVL6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.