Plásmido CRISPR de Activación (h) ELOVL6: sc-413125-ACT

ELOVL6 (proteína 6 de elongación de ácidos grasos de cadena muy larga) es una elongasa microsomal de ácidos grasos que cataliza, en el retículo endoplásmico, la extensión de ácidos grasos saturados y monoinsaturados C12–C16 hacia especies de cadena más larga, como el estearato (C18:0). Al moldear el pool celular de acil-CoA de cadena larga, ELOVL6 influye en la lipogénesis de novo, la composición lipídica de las membranas y la biosíntesis posterior de glicerolípidos y esfingolípidos. La actividad de ELOVL6 se entrecruza con redes de señalización metabólica, incluidos programas transcripcionales impulsados por SREBP1 y respuestas de estrés mediadas por lípidos que modulan la sensibilidad a la insulina y la inflamación. La expresión alterada de ELOVL6 se ha asociado con la desregulación de la homeostasis lipídica observada en fenotipos de enfermedad metabólica, incluidos la esteatosis hepática, la resistencia a la insulina relacionada con la obesidad y estados de riesgo cardiometabólico.

ELOVL6 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ELOVL6 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ELOVL6 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ELOVL6 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ELOVL6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ELOVL6. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ELOVL6 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ELOVL6 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ELOVL6 en células tumorales con expresión de ELOVL6 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.