ELOVL3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407282

Panoramica

ELOVL3 (proteina 3 dell’allungamento degli acidi grassi a catena molto lunga) è un’elongasi localizzata nel reticolo endoplasmatico che catalizza l’estensione di acil-CoA di acidi grassi saturi e monoinsaturi per generare acidi grassi a catena molto lunga utilizzati nella biosintesi di lipidi complessi. Attraverso il suo ruolo nell’allungamento degli acidi grassi, ELOVL3 contribuisce all’omeostasi lipidica, alla composizione delle membrane e alla formazione di riserve e pool di segnalazione derivati dai lipidi che influenzano il metabolismo cellulare. L’attività di ELOVL3 è associata a programmi metabolici lipidici in tessuti con elevato turnover dei lipidi, e la disregolazione delle vie di allungamento è spesso studiata nel contesto di squilibri metabolici e stress cellulare associato ai lipidi. Alterazioni nella composizione degli acidi grassi a catena molto lunga possono influire sulla funzione degli organelli e sulla segnalazione infiammatoria, rendendo ELOVL3 un nodo rilevante per studi meccanicistici di fenotipi associati al metabolismo lipidico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ELOVL3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ELOVL3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ELOVL3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ELOVL3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ELOVL3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ELOVL3 per lo studio della segnalazione di ELOVL3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ELOVL3 critici per la funzione di ELOVL3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ELOVL3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ELOVL3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ELOVL3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ELOVL3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ELOVL3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ELOVL3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ELOVL3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ELOVL3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.