Elongin B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402154

Panoramica

ELOB codifica Elongin B, un componente centrale del complesso Elongin BC che funge da adattatore negli assemblaggi delle ligasi E3 dell’ubiquitina e supporta la regolazione della trascrizione tramite interazioni con i fattori di elongazione. Nel complesso della ligasi dell’ubiquitina von Hippel–Lindau (VHL), Elongin B contribuisce a impalcatura i processi di riconoscimento del substrato e di ubiquitinazione che influenzano la segnalazione dell’ipossia, la proteostasi e le risposte cellulari allo stress. Attraverso questi ruoli, ELOB contribuisce alla regolazione del turnover proteico e di vie accoppiate alla trascrizione implicate nella biologia tumorale e nell’adattamento cellulare ai segnali del microambiente. L’alterazione dei complessi associati a Elongin BC è spesso oggetto di studio nelle ricerche sulla segnalazione oncogenica, sulle reti di degradazione dipendenti dall’ubiquitina e sul controllo trascrizionale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Elongin B (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ELOB in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ELOB insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ELOB a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Elongin B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ELOB per lo studio della segnalazione di Elongin B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ELOB critici per la funzione di Elongin B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ELOB per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Elongin B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Elongin B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ELOB. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Elongin B Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Elongin B (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ELOB per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ELOB definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.