Plasmide CRISPR/Cas9 KO Elk-1 (m): sc-420156

Présentation

Elk1 code pour Elk-1, un facteur de transcription à domaine ETS qui agit comme effecteur nucléaire de la signalisation MAPK/ERK. Après phosphorylation par les kinases ERK, JNK ou p38, Elk-1 coopère avec le facteur de réponse au sérum (SRF) sur les éléments de réponse au sérum afin de réguler des programmes de gènes de réponse immédiate, tels que FOS et des membres de la famille EGR. Cette activité relie des signaux extracellulaires à des modifications de la prolifération, de la différenciation, de la plasticité neuronale et de la transcription induite par le stress dans les cellules de souris. La transcription dépendante d’Elk-1 lorsqu’elle est dérégulée a été étudiée dans des contextes impliquant une signalisation mitogène altérée, l’expression de gènes associée à l’inflammation et des voies pertinentes pour la neurodégénérescence, ce qui en fait un nœud utile pour l’exploration des voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Elk-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Elk1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Elk1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Elk1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Elk-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Elk1 pour l'étude de la signalisation de Elk-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Elk1 essentiels à la fonction de Elk-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Elk1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Elk-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Elk-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Elk1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Elk-1 plasmide HDR (m) et le Elk-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Elk1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Elk1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.