eIF4AIII 더블 틈내기효소 플라스미드 (h): sc-402660-NIC

EIF4A3는 엑손 접합 복합체(exon junction complex, EJC)의 핵심 구성요소로 작용하는 DEAD-box RNA 헬리케이스인 eIF4AIII를 암호화하며, pre-mRNA 스플라이싱을 이후 단계인 mRNA의 수출, 세포 내 위치결정, 번역, 그리고 무의미 매개 분해(nonsense-mediated decay, NMD)와 연결한다. eIF4AIII는 ATP 의존적으로 RNA를 단단히 결합(클램핑)함으로써 스플라이싱 이후의 메신저 리보핵단백질(mRNP) 구조를 규정하는 데 기여하고, 전사체 감시와 단백질체의 정확성(proteome fidelity)에 영향을 준다. EIF4A3의 기능 또는 발현이 변하면 신경발달 관련 표현형 및 암과 연관된 유전자 발현 변화와 관련된 RNA 처리 프로그램의 이상 조절과 연결되는 것으로 보고되어 왔다. 그 결과 EIF4A3는 RNA 대사를 조절하는 경로, 전장 유전체 수준의 스플라이싱 결과, 그리고 스트레스 반응성 번역 조절 연구에서 자주 다뤄진다.

eIF4AIII 더블 니카제 플라스미드(h)는 human 세포주 내 EIF4A3 유전자좌의 고특이성 편집을 위해 설계된 쌍을 이루는 플라스미드로 구성됩니다. 각 플라스미드는 Cas9 D10A 니카아제와 EIF4A3 내의 반대 DNA 가닥을 표적으로 하는 고유한 sgRNA를 발현합니다. 반대 DNA 가닥의 인접 부위로 유도될 때, 두 니카아제는 서로 어긋난 단일 가닥 절단 부위를 생성하며, 이는 함께 엇갈린 이중 가닥 절단을 유발하여 두 가이드의 조화된 표적 활성을 필요로 합니다. 이렇게 생성된 DNA 절단은 내인성 세포 복구 경로, 특히 비동형 말단 결합(NHEJ)을 통해 해결되며, 이는 EIF4A3의 기능을 방해하는 삽입 또는 결실을 초래한다. 표적 부위에서 이중 sgRNA 결합을 요구함으로써, 이중 니킹 접근법은 편집 특이성을 향상시키고 표적 정밀도에 대한 추가적인 제어가 필요한 응용을 위한 보완적인 CRISPR 전략을 제공한다.

편집된 세포를 효율적으로 식별할 수 있도록, 한 플라스미드는 형광 시각화를 위한 GFP를 발현하며, 다른 플라스미드는 항생제 선별을 위한 푸로마이신 내성 유전자를 포함하고 있습니다. 이러한 기능들은 공동 형질 도입된 세포 집단의 효율적인 농축을 지원하며, EIF4A3 기능이 손상된 클론의 검증을 단순화합니다.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.