Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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eIF3η Double Nickase Plasmid (h): sc-400817-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das eIF3η Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- eIF3η Double-Nickase-Plasmid (h) und eIF3η Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EIF3B abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: eIF3η: sc-137214
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
eIF3η Double Nickase Plasmid (h) | sc-400817-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
eIF3η Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400817-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EIF3B kodiert die Untereinheit B des eukaryotischen Translationsinitiationsfaktors 3 (eIF3η), eine zentrale Komponente des aus mehreren Untereinheiten bestehenden eIF3-Komplexes, der Initiationsfaktoren und die 40S-ribosomale Untereinheit als Gerüst zusammenführt, um die Rekrutierung der mRNA und die Erkennung des Startcodons zu fördern. Über seine Rolle bei der cap-abhängigen Translationsinitiation trägt eIF3η zur Proteostase, zum Fortschreiten des Zellzyklus und zur adaptiven translationalen Kontrolle unter zellulärem Stress bei. Eine veränderte Funktion des eIF3-Komplexes wurde mit fehlregulierten Proteinsyntheseprogrammen in Verbindung gebracht, wie sie bei proliferativen und Stressantwort-Phänotypen beobachtet werden, wodurch EIF3B ein nützlicher Ansatzpunkt für die Untersuchung translationaler Reprogrammierung ist. Eine Perturbation von EIF3B ist daher für die Forschung zu Wachstumssignalen und Mechanismen der Translationskontrolle relevant, die in krankheitsassoziierten zellulären Zuständen häufig umgestaltet werden.
eIF3η Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EIF3B-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EIF3B abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EIF3B-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EIF3B-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.