eIF3η CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400817

概要

EIF3Bは、真核生物翻訳開始因子3（eIF3）複合体の中核サブユニットであるeIF3ηをコードしており、キャップ依存的翻訳において40Sリボソーム小サブユニットのリクルートおよびプレイニシエーション複合体の組み立てを調整する。eIF3ηは他の開始因子やmRNAとの相互作用を介して開始コドンの選択を支え、増殖・代謝・ストレス適応に関連する転写産物の翻訳効率を制御する。EIF3Bの機能はプロテオスタシスや細胞周期進行を調節する経路とも交差しており、翻訳開始の破綻はしばしば腫瘍性シグナル伝達や細胞の適応度の変化と関連付けられる。翻訳制御の中枢として、EIF3Bは増殖、ストレス応答、形質転換に伴うタンパク質合成プログラムの変化といった文脈で一般的に研究されている。

eIF3η CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるEIF3B遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、EIF3B内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、EIF3Bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、eIF3ηタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、eIF3ηシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、EIF3B欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• eIF3ηの機能に不可欠なEIF3Bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、EIF3Bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• eIF3η CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびeIF3η CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、EIF3B遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  eIF3η HDRプラスミド（h）および eIF3η HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEIF3Bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEIF3B標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。