eIF3η CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400817

Übersicht

EIF3B kodiert eine zentrale Untereinheit des eukaryotischen Translationsinitiationsfaktor‑3‑(eIF3)-Komplexes, eIF3η, der die Rekrutierung der 40S‑ribosomalen Untereinheit und den Aufbau des Präinitiationskomplexes während der cap‑abhängigen Translation koordiniert. Über Wechselwirkungen mit weiteren Initiationsfaktoren und mRNA unterstützt eIF3η die Auswahl des Startcodons und steuert die Translationseffizienz von Transkripten, die mit Wachstum, Stoffwechsel und Stressanpassung verknüpft sind. Die Funktion von EIF3B überschneidet sich mit Signalwegen, die Proteostase und Zellzyklus‑Progression regulieren, und eine fehlregulierte Translationsinitiation ist häufig mit onkogener Signalübertragung und veränderter zellulärer Fitness assoziiert. Als zentraler Knotenpunkt der Translationskontrolle wird EIF3B häufig in Zusammenhängen wie Proliferation, Stressantworten und transformationsbedingten Veränderungen von Proteinsyntheseprogrammen untersucht.

Das eIF3η CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des EIF3B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des EIF3B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von EIF3B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die eIF3η-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von EIF3B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der eIF3η-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf EIF3B-Exone abzielen, die für die eIF3η-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere EIF3B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom eIF3η CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom eIF3η CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des EIF3B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das eIF3η HDR-Plasmid (h) und eIF3η HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von EIF3B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten EIF3B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.