EIF2D Double Nickaseプラスミド (h): sc-405379-NIC

EIF2D は、真核生物翻訳開始因子 2D をコードしており、非典型的な開始因子として、特定の細胞状況下での代替的な翻訳開始や、tRNA をリボソームの P サイトへ供給する過程に関与するとされています。翻訳制御におけるその役割を通じて、EIF2D はプロテオスタシスや細胞ストレスへの適応応答を司る経路と交差し、eIF2 シグナル伝達や統合ストレス応答（ISR）のダイナミクスに関連するモジュールとも関わります。翻訳開始やストレス適応的タンパク質合成の攪乱は、神経変性、がん細胞の可塑性、ウイルス感染モデルで研究される機序とも広く関連しており、翻訳プログラムの変化が細胞状態の遷移を再構築し得ます。そのため EIF2D は、開始因子の利用の変化が mRNA 特異的な翻訳や下流の表現型にどのような影響を与えるかという観点から、しばしば研究対象となっています。

EIF2D ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における EIF2D 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、EIF2D内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、EIF2Dの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、EIF2Dが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。