eIF2A Double Nickase Plasmid (m): sc-432849-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das eIF2A Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- eIF2A Double-Nickase-Plasmid (m) und eIF2A Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Eif2a abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: eIF2A: sc-517214
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
eIF2A Double Nickase Plasmid (m) | sc-432849-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
eIF2A Double Nickase Plasmid (m2) | sc-432849-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen **Eif2a** kodiert **eIF2A**, einen alternativen Translationsinitiationsfaktor, der die Bereitstellung der Initiator‑Met‑tRNA am Ribosom unterstützt, wenn die Aktivität des kanonischen eIF2 eingeschränkt ist. eIF2A trägt zur Kontrolle der Translation während zellulären Stresses bei, steht in Wechselwirkung mit der Signalgebung der integrierten Stressantwort (ISR) und mit selektiven Translationsprogrammen, die den Proteostase‑Haushalt umgestalten helfen. Indem **Eif2a** beeinflusst, wie Zellen unter Nährstofflimitierung, ER‑Stress oder anderen Störungen die Proteinsynthese initiieren, wirkt es auf Signalwege, die Überleben, Differenzierung und Anpassung steuern. Fehlregulierte Initiation der Translation und stressabhängige Proteinsynthese sind breit relevant für Neurodegeneration, metabolische Dysfunktionen und die Krebsbiologie, sodass **Eif2a** ein nützlicher Knotenpunkt für mechanistische Studien stressgekoppelter Genexpression ist.
eIF2A Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Eif2a-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Eif2a abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Eif2a-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Eif2a-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.