Particules Lentivirales d'Activation (r) EGR1: sc-437290-LAC

EGR1 (early growth response 1) est un facteur de transcription de réponse immédiate (« immediate-early »), rapidement induit par des signaux mitogènes et de stress, qui agit comme un régulateur central de programmes d’expression génique dépendants des stimuli dans les cellules de rat. Il intègre des signaux en amont issus des voies MAPK/ERK et PKC, de la signalisation calcique et des voies des facteurs de croissance, afin de contrôler la transcription liée à la progression du cycle cellulaire, à la différenciation, à l’apoptose et à la plasticité synaptique. EGR1 module des réseaux en aval impliqués dans le remodelage de la matrice extracellulaire, la signalisation des cytokines et des chimiokines, ainsi que l’activité vasculaire et neuronale, ce qui le rend largement pertinent pour des modèles d’inflammation, de fibrose et de neuroadaptation. Une activité d’EGR1 dérégulée a été associée à des phénotypes de prolifération et de réponse au stress altérés dans divers contextes pertinents pour les maladies, ce qui soutient son intérêt comme nœud mécanistique pour l’exploration des voies de signalisation.

Les particules d'activation lentivirales EGR1 (r) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales EGR1 (r) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription , où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de EGR1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.