EGR1 CRISPR Activationプラスミド (r): sc-437290-ACT

EGR1（early growth response 1）は、ラット細胞において細胞外からの刺激を遺伝子発現プログラムへと迅速に結び付ける、即時早期応答型のジンクフィンガー転写因子です。MAPK/ERK、PKC、ならびにカルシウム依存性シグナル伝達の下流で誘導され、状況依存的な転写制御を通じて、増殖、分化、シナプス可塑性、血管新生応答、ストレス適応などの過程を調節します。EGR1の活性はAP-1/NF-κB関連ネットワークと統合的に作用し、増殖因子刺激や損傷後にクロマチン状態や転写状態を再構築し得ます。EGR1発現の異常は、炎症、線維化、血管リモデリング、腫瘍関連の転写プログラムと関連することが文献上報告されており、刺激応答性の遺伝子制御機構を解明するための有用な結節点（ノード）となります。

EGR1 CRISPR活性化プラスミド（r）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

EGR1 CRISPR 活性化プラスミド (r) は、ヒト細胞株における 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体は転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性EGR1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然の遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEGR1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、および発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEGR1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。