Plasmide CRISPR d'Activation (h) EF-2: sc-401163-ACT

Le gène humain **EEF2** code le facteur d’élongation 2 (EF‑2), un composant essentiel du cycle d’élongation de la traduction, qui catalyse la translocation du ribosome le long de l’ARNm de manière dépendante du GTP. L’activité d’EF‑2 constitue un déterminant majeur de la production protéique globale et est régulée par des voies de signalisation liées aux nutriments et au stress, notamment l’axe mTOR et eEF2K, qui coordonnent la synthèse des protéines avec l’état énergétique cellulaire. Des perturbations de l’expression d’EEF2 ou de la dynamique de phosphorylation d’EF‑2 peuvent modifier les programmes de contrôle traductionnel, influençant la prolifération, l’adaptation au stress et le remodelage métabolique. En tant que nœud central de l’homéostasie traductionnelle, EEF2 est fréquemment étudié dans des contextes de signalisation oncogénique, de neurobiologie et de réponses au stress cellulaire, où une synthèse protéique dérégulée contribue à des phénotypes associés aux maladies.

EF-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de EEF2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

EF-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus EEF2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription EEF2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de EF-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus EEF2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de EF-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie EF-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de EEF2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.