The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
EF-1 γ双切口酶质粒(h): sc-405691-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- EF-1 γ 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- EF-1 γ双切酶质粒（h）和EF-1 γ双切酶质粒（h2）编码针对EEF1G的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：EF-1 γ: sc-393378，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
EF-1 γ双切口酶质粒(h) | sc-405691-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EF-1 γ双切口酶质粒(h2) | sc-405691-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EEF1G 编码真核翻译延伸因子 1γ（EF-1γ），它是 eEF1 复合体的核心组成部分，在 mRNA 翻译过程中将氨酰化 tRNA 递送至核糖体。除蛋白质合成之外，EF-1γ 还参与细胞骨架的组织与蛋白质稳态维持，将翻译调控与细胞生长及应激适应程序联系起来。在增殖性与应激相关的细胞状态中，已观察到 EEF1G 的表达或网络连接性发生改变，因此它对于研究疾病生物学中与翻译相关的重塑过程具有意义。作为 RNA–蛋白及翻译因子互作组中连接度很高的节点，EF-1γ 常被用作切入点，用于探究蛋白质合成、信号传导与细胞状态转换之间的耦联关系。
EF-1 γ 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 EEF1G 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对EEF1G内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏EEF1G的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了EEF1G基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。