Plasmide CRISPR/Cas9 KO EBP1 (h): sc-402177

Présentation

PA2G4 code pour EBP1, un facteur se liant à l’ARN et aux protéines, localisé à la fois dans le cytoplasme et le noyau, et participant à la coordination de l’expression génique aux niveaux transcriptionnel et traductionnel. EBP1 a été associée à la signalisation en aval des récepteurs à activité tyrosine kinase ainsi qu’à la régulation de la progression du cycle cellulaire, de la prolifération et de la différenciation, via la modulation de la stabilité des ARNm, de processus associés aux ribosomes et de programmes transcriptionnels. En influençant les voies de contrôle de la croissance et les réseaux d’expression génique sensibles au stress, PA2G4 est fréquemment étudié dans le contexte de la signalisation oncogénique et d’autres maladies caractérisées par une prolifération dérégulée. Ses rôles multiples en font un nœud utile pour analyser comment les signaux des facteurs de croissance sont intégrés au métabolisme de l’ARN et à la régulation associée à la chromatine dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO EBP1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PA2G4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PA2G4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PA2G4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine EBP1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PA2G4 pour l'étude de la signalisation de EBP1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PA2G4 essentiels à la fonction de EBP1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PA2G4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le EBP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le EBP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PA2G4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le EBP1 plasmide HDR (h) et le EBP1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PA2G4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PA2G4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.