EAP30 CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (h): sc-406312

개요

SNF8는 리소좀 분해를 위해 유비퀴틴화된 막 단백질을 다중소포체(multivesicular body, MVB)로 분류해 엔도좀에서 선별하는 과정을 조정하는 ESCRT-II 복합체의 핵심 구성 요소인 EAP30을 암호화한다. ESCRT 의존적 막 재형성을 통해 EAP30은 수용체 다운레귤레이션, 엔도-리소좀 수송, 그리고 내강 소포(intraluminal vesicle) 형성 동안 ESCRT-II와 ESCRT-III의 연결을 지원한다. 이러한 과정은 신호전달 경로의 약화(attenuation), 막 단백질 항상성, 그리고 ESCRT 기계에 의존하는 세포질분열 및 바이러스 출아(budding)의 일부 측면에 영향을 미친다. ESCRT 매개 수송의 이상 조절은 성장인자 수용체 신호의 변화, 단백질 항상성(프로테오스타시스) 스트레스, 유전체 불안정성과 연관된 것으로 보고되어 왔으며, SNF8/EAP30은 암 생물학 및 신경퇴행과 관련된 엔도-리소좀 결함 연구에서 중요한 표적이 된다.

EAP30 CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h)는 human 세포주에서 SNF8 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 SNF8 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 SNF8의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 EAP30 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 EAP30 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 SNF8 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• EAP30 기능에 중요한 SNF8 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 SNF8 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• EAP30 CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h) 및 EAP30 CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는 gRNA는 SNF8 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  EAP30 HDR 플라스미드 (h) 및 EAP30 HDR 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 SNF8 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 SNF8 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.