Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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EAP30 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406312
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- EAP30 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico EAP30, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: EAP30 Anticuerpo (C-11): sc-390747
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
EAP30 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-406312 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
SNF8 codifica EAP30, un componente central del complejo ESCRT-II que coordina la clasificación endosomal de proteínas de membrana ubiquitinadas hacia cuerpos multivesiculares para su degradación lisosomal. Mediante el remodelado de membranas dependiente de ESCRT, EAP30 favorece la desregulación de receptores, el tráfico endolisosomal y el acoplamiento de ESCRT-II con ESCRT-III durante la formación de vesículas intraluminales. Estos procesos influyen en la atenuación de vías de señalización, la homeostasis de proteínas de membrana y aspectos de la citocinesis y la gemación viral que dependen de la maquinaria ESCRT. La desregulación del tráfico mediado por ESCRT se ha vinculado con alteraciones en la señalización de receptores de factores de crecimiento, estrés de proteostasis e inestabilidad genómica, lo que hace que SNF8/EAP30 sea relevante para estudios de biología del cáncer y de defectos endolisosomales asociados a la neurodegeneración.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO EAP30 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SNF8 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SNF8 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SNF8 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína EAP30.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SNF8 para la investigación de la señalización de EAP30, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de SNF8 críticos para la función de EAP30
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SNF8 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido EAP30 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido EAP30 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SNF8. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR EAP30 (h) y el plásmido HDR EAP30 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SNF8 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SNF8 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.