EAAT4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422986
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- EAAT4 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico EAAT4, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:EAAT4 Anticorpo (6D9): sc-293344
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
EAAT4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422986 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Slc1a6 codifica o transportador de aminoácidos excitatórios 4 (EAAT4), um transportador de glutamato de alta afinidade dependente de Na+ que contribui para a depuração do glutamato extracelular e limita a sinalização excitatotóxica nas sinapses. No SNC do camundongo, o EAAT4 é enriquecido nos neurônios de Purkinje do cerebelo e molda a transmissão sináptica ao acoplar a captação de glutamato a gradientes iônicos, influenciando assim a excitabilidade e a plasticidade neuronais. Por meio da regulação da neurotransmissão glutamatérgica, o EAAT4 se integra a vias ligadas à homeostase sináptica, à sinalização dependente de cálcio e a respostas neuroinflamatórias ao glutamato desregulado. A capacidade alterada de transporte de glutamato é relevante em modelos de disfunção cerebelar e em fenótipos mais amplos associados à neurodegeneração, nos quais a sinalização excitatória e a integridade sináptica estão comprometidas.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO EAAT4 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Slc1a6 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Slc1a6, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Slc1a6 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína EAAT4.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Slc1a6 para a investigação da sinalização de EAAT4, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Slc1a6 críticos para a função EAAT4
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Slc1a6 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo EAAT4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo EAAT4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Slc1a6. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo EAAT4 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR EAAT4 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Slc1a6 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Slc1a6 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.