Plasmide Double Nickase (h) Dyskerin: sc-401278-NIC

DKC1 code la dyskérine, une protéine nucléolaire essentielle qui catalyse la pseudouridylation des ARNr et des snARN au sein des complexes ribonucléoprotéiques nucléolaires H/ACA, contribuant à la biogenèse des ribosomes et à la fidélité de l’épissage du pré‑ARNm. La dyskérine s’associe également au complexe ribonucléoprotéique de la télomérase afin de stabiliser l’ARN de la télomérase et d’influencer le maintien des télomères, reliant ainsi la modification des ARN à la stabilité du génome. Par ces fonctions, DKC1 affecte le contrôle de la traduction, la signalisation du stress nucléolaire et les programmes de prolifération cellulaire. Une altération génétique ou un dysfonctionnement de DKC1 est impliqué dans les troubles de la biologie des télomères et les ribosomopathies, constituant un lien mécanistique entre un traitement de l’ARN défaillant et une homéostasie cellulaire perturbée.

Dyskerin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DKC1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DKC1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DKC1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DKC1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.