Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 Double Nickase Plasmid (h): sc-400571-NIC

DVL2 kodiert Dishevelled 2 (Dvl-2), ein zytoplasmatisches Phosphoprotein, das als zentraler Signaltransduktor für Frizzled-Rezeptoren in Wnt-Signalwegen fungiert. Über regulierte Protein-Protein-Interaktionen koordiniert Dvl-2 sowohl den kanonischen Wnt/β-Catenin-Signalweg als auch nichtkanonische Signalwege der planaren Zellpolarität und des Wnt/Ca²⁺-Signalwegs und beeinflusst damit Zellspezifizierung, Polarität, Motilität und die Organisation des Zytoskeletts. Eine abnorme DVL2-Aktivität oder ein „Rewiring" der Signalwege wird mit einer fehlregulierten Wnt-Signalgebung in verschiedensten Krebsarten und Entwicklungsphänotypen in Verbindung gebracht, was DVL2 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Analyse von Signalweg-Crosstalk und kontextabhängigen Signalausgängen macht. DVL2 ist zudem in endozytotischen Transportprozessen und die Dynamik von Signaling-Scaffolds eingebunden und unterstützt damit mechanistische Studien zu rezeptornahen Ereignissen und nachgeschalteten transkriptionellen Programmen.

Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DVL2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DVL2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DVL2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DVL2-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.