Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420081-ACT

O gene murino Dvl2 codifica a Dishevelled 2 (DVL2), uma proteína citoplasmática de andaime (scaffold) que transmite sinais de Wnt para efetores a jusante tanto na via canônica dependente de β-catenina (transcrição) quanto nas vias não canônicas de polaridade planar (PCP) e Wnt/Ca2+. Ao acoplar as entradas dos receptores Frizzled/LRP a componentes da via como Axin, GSK3 e pequenas GTPases, a DVL2 influencia a especificação do destino celular, a polaridade, a migração e a organização do citoesqueleto durante o desenvolvimento e a homeostase tecidual. A sinalização Wnt–DVL2 desregulada está implicada em programas aberrantes de proliferação e diferenciação, tornando o Dvl2 um alvo frequente em estudos de redes de sinalização oncogênica e de distúrbios do desenvolvimento. Seu papel central como adaptador também sustenta a investigação da comunicação cruzada (cross-talk) da via com MAPK, PI3K/AKT e processos de remodelamento do citoesqueleto em fenótipos celulares relevantes para doenças.

Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Dvl2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Dvl2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Dvl2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Dvl2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 em células tumorais com expressão de Dvl2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.