dUTPase Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-405843-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- dUTPaseO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase dUTPase (h) e o Plasmídeo Double Nickase dUTPase (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para DUT. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:dUTPase Anticorpo (H-9): sc-166856
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
dUTPase Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-405843-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
dUTPase Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-405843-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DUT codifica a dUTPase humana, uma enzima do metabolismo de nucleotídeos que hidrolisa dUTP em dUMP, reduzindo assim os reservatórios intracelulares de dUTP e fornecendo substrato para a biossíntese de timidilato. Ao prevenir a incorporação incorreta de uracilo no DNA, a dUTPase sustenta a integridade do genoma durante a replicação e o reparo do DNA e ajuda a limitar ciclos de reparo por excisão de base desencadeados por glicosilases de uracilo no DNA. A atividade de DUT integra-se ao metabolismo de um carbono dependente de folato e à homeostase de pirimidinas, ligando o equilíbrio de nucleotídeos às respostas ao estresse replicativo. A desregulação do metabolismo de dUTP e o acúmulo de uracilo estão associados ao aumento da sinalização de dano ao DNA e têm sido investigados em contextos de instabilidade genômica e biologia tumoral.
dUTPase O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus DUT em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de DUT. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função DUT. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com DUT interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.