dUTPase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405843

Visão geral

DUT codifica a dUTPase humana, uma enzima-chave do metabolismo de nucleotídeos que hidrolisa dUTP em dUMP e pirofosfato, mantendo assim baixos os níveis intracelulares de dUTP e fornecendo substrato para a biossíntese de timidilato. Ao limitar a incorporação de uracilo no DNA genômico, a dUTPase sustenta a fidelidade da replicação e a estabilidade do genoma e se conecta funcionalmente às vias de reparo por excisão de bases que removem uracilo do DNA. Alterações na atividade de DUT podem modular respostas ao estresse replicativo e à sinalização de dano ao DNA, processos frequentemente perturbados em distúrbios proliferativos e em células submetidas a estresse genotóxico. Como um nó central na homeostase de pirimidinas, DUT é amplamente estudado no contexto da progressão do ciclo celular, da manutenção do DNA mitocondrial e nuclear e da mutagênese impulsionada por desequilíbrios de nucleotídeos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO dUTPase (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene DUT em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do DUT, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do DUT na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína dUTPase.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de DUT para a investigação da sinalização de dUTPase, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) DUT críticos para a função dUTPase
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos DUT para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo dUTPase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo dUTPase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus DUT. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo dUTPase Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR dUTPase (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia DUT para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo DUT definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.