DTX3L Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403953-ACT

DTX3L (deltex E3 ubiquitin ligase 3L) codifica uma ligase E3 de ubiquitina humana que participa da regulação proteica dependente de ubiquitina e atua em coordenação com a PARP9 na sinalização estimulada por interferon. Por meio da modulação da ubiquitinação e do crosstalk com a maquinaria de resposta a danos no DNA, a DTX3L contribui para o controle do turnover proteico, de processos associados à cromatina e das saídas de vias da imunidade inata. Alterações na atividade de DTX3L têm sido associadas à desregulação da sinalização inflamatória e a mudanças nas respostas celulares ao estresse, o que a torna relevante para estudos de regulação imune e estabilidade do genoma. Suas funções moleculares posicionam a DTX3L como um nó útil para dissecar a dinâmica da via da ubiquitina e programas transcricionais induzidos por interferon.

DTX3L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DTX3L sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DTX3L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DTX3L em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DTX3L, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DTX3L. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DTX3L nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DTX3L no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DTX3L em células tumorais com expressão de DTX3L silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.