Doublecortin/DCX Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400033

Panoramica

DCX codifica la doublecortina, una proteina associata ai microtubuli che si lega ai microtubuli polimerizzati e li stabilizza per coordinare la migrazione neuronale, la crescita dei neuriti e la formazione degli strati corticali durante lo sviluppo del sistema nervoso. La doublecortina agisce all’interno di programmi di rimodellamento del citoscheletro che integrano la dinamica dei microtubuli con il posizionamento del centrosoma e la guida del cono di crescita, influenzando la polarizzazione e l’estensione assonale nei neuroni in sviluppo. Varianti patogene o una disregolazione di DCX sono associate a disturbi del neurosviluppo caratterizzati da un’organizzazione corticale alterata, tra cui la lissencefalia legata al cromosoma X e l’eterotopia a banda sottocorticale. In quanto marcatore di biologia cellulare dei neuroblasti migranti e dei neuroni immaturi, DCX è ampiamente utilizzato per studiare le traiettorie di sviluppo e i meccanismi che governano il posizionamento neuronale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Doublecortin/DCX (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DCX in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DCX insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DCX a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Doublecortin/DCX.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DCX per lo studio della segnalazione di Doublecortin/DCX, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DCX critici per la funzione di Doublecortin/DCX
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DCX per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Doublecortin/DCX CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Doublecortin/DCX CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DCX. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Doublecortin/DCX Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Doublecortin/DCX (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DCX per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DCX definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.