Plasmide CRISPR/Cas9 KO DOCK 8 (h): sc-401727

Présentation

DOCK8 code un facteur d’échange de nucléotides guanyliques (GEF) qui active des GTPases de la famille Rho, coordonnant le remodelage du cytosquelette d’actine nécessaire à la migration et à l’adhésion des cellules immunitaires, ainsi qu’à la formation de la synapse immunologique. DOCK8 soutient la survie et la signalisation des lymphocytes, influençant des processus tels que la chimiotaxie, l’activation induite par l’antigène et la fonction effectrice cytotoxique. L’altération de DOCK8 est associée à des phénotypes de déficit immunitaire primaire caractérisés par une réponse antivirale déficiente, une inflammation allergique et une susceptibilité accrue aux cancers, soulignant son rôle central dans l’homéostasie immunitaire. Dans les études mécanistiques, DOCK8 est fréquemment étudié dans les voies contrôlant la dynamique du cytosquelette, la polarité cellulaire et la stabilité de la synapse immunologique dans les lymphocytes T, les lymphocytes B, les cellules NK et les cellules dendritiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DOCK 8 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DOCK8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DOCK8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DOCK8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DOCK 8.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DOCK8 pour l'étude de la signalisation de DOCK 8, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DOCK8 essentiels à la fonction de DOCK 8
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DOCK8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DOCK 8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DOCK 8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DOCK8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DOCK 8 plasmide HDR (h) et le DOCK 8 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DOCK8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DOCK8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.