Plásmido Doble Nickase (h) DOC1: sc-407358-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)DOC1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa DOC1 (h) y el plásmido de doble nickasa DOC1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a FILIP1L. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: DOC1 Anticuerpo (D-2): sc-376472
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) DOC1 | sc-407358-NIC | 20 µg | $410.00 |
FILIP1L (DOC1) codifica la proteína similar a la proteína 1 que interactúa con filamina A, un regulador asociado al citoesqueleto implicado en la remodelación de actina, el control de la forma celular y la señalización dependiente de la adhesión. DOC1 se ha relacionado con la modulación de la migración y la proliferación celulares a través de vías que coordinan las interacciones con la matriz extracelular y la dinámica impulsada por las GTPasas de la familia Rho. Se han descrito alteraciones en la expresión de FILIP1L en múltiples contextos de cáncer y se estudia en relación con la invasión, fenotipos asociados a metástasis y programas transcripcionales sensibles al estrés. Estas características hacen de DOC1 un nodo útil para investigar cómo la organización del citoesqueleto se integra con el control del crecimiento y la motilidad en células humanas.
DOC1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FILIP1L en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FILIP1L. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FILIP1L. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FILIP1L alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.