Dnmt3L CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-424871

概要

Dnmt3lは、触媒活性を持たない補助因子DNMT3Lをコードしており、DNMT3AおよびDNMT3Bというde novo DNAメチルトランスフェラーゼの働きを促進して、発生過程におけるDNAメチル化パターンの確立と維持に寄与します。マウスでは、Dnmt3Lは生殖系列のエピジェネティック・プログラミングにおいて特に重要であり、レトロトランスポゾンやインプリント制御領域のメチル化を支えることで、ゲノムの安定性と親由来特異的な遺伝子発現制御に貢献します。これらの機能を通じて、Dnmt3Lはクロマチン状態、転写サイレンシング、および減数分裂に伴うリプログラミングを協調させるエピジェネティック制御経路に組み込まれています。DNMT3Lに関連するメチル化プロセスの制御異常は、インプリンティング異常、トランスポゾン抑制の変化、さらにはより広範なエピゲノム不安定性と結びつき、発生表現型や疾患関連のエピジェネティック状態に影響を及ぼし得ます。

Dnmt3L CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるDnmt3l遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Dnmt3l内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Dnmt3lのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Dnmt3Lタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Dnmt3Lシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Dnmt3l欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Dnmt3Lの機能に不可欠なDnmt3lエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Dnmt3lゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Dnmt3L CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびDnmt3L CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Dnmt3l遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Dnmt3L HDRプラスミド（m）および Dnmt3L HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDnmt3lホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDnmt3l標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。