Dnmt2 CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (m): sc-420034

개요

Trdmt1은 Dnmt2를 암호화하며, Dnmt2는 진화적으로 매우 잘 보존된 RNA 시토신-5 메틸트랜스퍼레이스로서 주로 tRNA를 수정합니다(특히 시토신 38 위치의 m5C). 이러한 tRNA 메틸화는 tRNA 안정성, 코돈 해독의 정확성, 그리고 세포 스트레스 반응에 영향을 줍니다. Dnmt2는 RNA 메틸화를 조절함으로써 번역 조절에 기여하며, RNA 가공 및 유전체 유지 경로와 교차하는 더 광범위한 에피트랜스크립톰 네트워크에도 관여합니다. TRDMT1/DNMT2 활성의 변화는 단백질 항상성(프로테오스타시스) 및 스트레스 적응의 교란과 연관되어 왔고, 모델 시스템에서 종양성(발암성) 표현형과 신경생물학적 과정과의 관련성이 보고된 바 있습니다. 마우스에서는 Trdmt1이 RNA 매개 유전자 발현 조절, 세포 항상성, 그리고 환경적·대사적 스트레스 요인에 대한 맥락 의존적 반응에서의 역할을 중심으로 자주 연구됩니다.

Dnmt2 CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m)는 mouse 세포주에서 Trdmt1 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 Trdmt1 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 Trdmt1의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 Dnmt2 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 Dnmt2 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 Trdmt1 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• Dnmt2 기능에 중요한 Trdmt1 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 Trdmt1 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• Dnmt2 CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m) 및 Dnmt2 CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m2)에 의해 암호화되는 gRNA는 Trdmt1 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  Dnmt2 HDR 플라스미드 (m) 및 Dnmt2 HDR 플라스미드 (m2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 Trdmt1 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 Trdmt1 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.