DnaJC12 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-412707

Visão geral

DNAJC12 codifica a DnaJC12, uma co-chaperona do tipo J-domain que atua em parceria com a maquinaria de HSP70 para regular o dobramento de proteínas e a proteostase no citosol e no retículo endoplasmático. Ao estimular a atividade ATPase da HSP70, a DnaJC12 favorece a maturação e a estabilidade de proteínas cliente e ajuda a coordenar as respostas celulares ao estresse proteotóxico. Essa rede de chaperonas interage com as vias de ubiquitina–proteassoma e de degradação associada ao retículo endoplasmático (ERAD) para manter o controle de qualidade proteica. Alterações na função de DNAJC12 têm sido associadas a perturbações da homeostase enzimática e a fenótipos neurometabólicos, tornando-o relevante para o estudo da adaptação ao estresse e de vias de maturação proteica em células humanas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO DnaJC12 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene DNAJC12 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do DNAJC12, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do DNAJC12 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína DnaJC12.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de DNAJC12 para a investigação da sinalização de DnaJC12, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) DNAJC12 críticos para a função DnaJC12
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos DNAJC12 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo DnaJC12 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo DnaJC12 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus DNAJC12. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo DnaJC12 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR DnaJC12 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia DNAJC12 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo DNAJC12 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.