DNA pol θ 더블 틈내기효소 플라스미드 (m): sc-429582-NIC
- Target species: mouse
- 20 µg of transfection-ready, purified plasmid DNA; Suitable for up to 20 transfections
- DNA pol θ Double Nickase Plasmid (m) 는 한쌍의D10A mutated Cas9 nuclease 와 타깃특정 20 nt guide RNA (gRNA)를 인코딩하는 plasmid를 포함하고있으며 gRNA는 대응 CRISPR/Cas9 KO보다 높은 특이성을 띤 knockout gene을 발현하도록 디자인되였습니다.
- 한쌍의 gRNA는 약 20bp가량 떨어져 있으며 이는 게놈DNA의 Cas9-mediated double nicking을 발생하여 DSB를 모방합니다.
- 한쌍의 plasmid 중 하나는 selection에 필요한 puromycin-resistance gene을, 다른하나는 형질주입효율을 확인하는 GFP marker를 보유하고있습니다.
- DNA pol θ 더블 니케이스 플라스미드 (m) 및 DNA pol θ 더블 니케이스 플라스미드 (m2)는 Polq을 표적하는 서로 다른 쌍을 이루는 gRNA 설계를 암호화합니다. 하나 또는 두 가지 디자인 모두 이용 가능할 수 있습니다
주문정보
| 제품명 | 카탈로그 번호 | 단위 | 가격 | 수량 | 관심품목 | |
DNA pol θ 더블 틈내기효소 플라스미드 (m) | sc-429582-NIC | 20 µg | $410.00 |
마우스 Polq 유전자는 DNA 중합효소 세타(POLθ)를 암호화하며, POLθ는 고오류성 A-패밀리 중합효소로서 고유의 헬리케이스 유사 활성을 지니고 DNA 이중가닥 절단(DSB) 수리 과정에서 대체 말단 연결(alternative end joining)을 지원합니다. POLθ는 미세상동성 매개 말단 연결(MMEJ)의 핵심 작동 인자로, 유전체 안정성, 복제 스트레스 내성, 그리고 정지하거나 붕괴된 복제 포크의 해결에 영향을 미칩니다. 또한 그 활성은 상동 재조합(homologous recombination) 및 고전적 비상동 말단 연결(classical non-homologous end joining)과 기능적으로 교차하여, DNA 손상 수리에서 나타나는 돌연변이 결과를 형성합니다. POLθ 의존적 수리가 조절 이상을 보일 경우, 암 생물학 및 DNA 수리 결함 모델 시스템에서 흔히 연구되는 유전체 불안정성 증가 표현형과 연관되는 것으로 보고되어 왔습니다.
DNA pol θ 더블 니카제 플라스미드(m)는 mouse 세포주 내 Polq 유전자좌의 고특이성 편집을 위해 설계된 쌍을 이루는 플라스미드로 구성됩니다. 각 플라스미드는 Cas9 D10A 니카아제와 Polq 내의 반대 DNA 가닥을 표적으로 하는 고유한 sgRNA를 발현합니다. 반대 DNA 가닥의 인접 부위로 유도될 때, 두 니카아제는 서로 어긋난 단일 가닥 절단 부위를 생성하며, 이는 함께 엇갈린 이중 가닥 절단을 유발하여 두 가이드의 조화된 표적 활성을 필요로 합니다. 이렇게 생성된 DNA 절단은 내인성 세포 복구 경로, 특히 비동형 말단 결합(NHEJ)을 통해 해결되며, 이는 Polq의 기능을 방해하는 삽입 또는 결실을 초래한다. 표적 부위에서 이중 sgRNA 결합을 요구함으로써, 이중 니킹 접근법은 편집 특이성을 향상시키고 표적 정밀도에 대한 추가적인 제어가 필요한 응용을 위한 보완적인 CRISPR 전략을 제공한다.
편집된 세포를 효율적으로 식별할 수 있도록, 한 플라스미드는 형광 시각화를 위한 GFP를 발현하며, 다른 플라스미드는 항생제 선별을 위한 푸로마이신 내성 유전자를 포함하고 있습니다. 이러한 기능들은 공동 형질 도입된 세포 집단의 효율적인 농축을 지원하며, Polq 기능이 손상된 클론의 검증을 단순화합니다.
연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.