DMRT1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402856-NIC

DMRT1 codifica un fattore di trascrizione con dominio DM che si lega a elementi di DNA a sequenza specifica per regolare i programmi di determinazione e differenziamento sessuale, con ruoli di primo piano nello sviluppo delle cellule di Sertoli e delle cellule germinali. Nei tessuti umani partecipa a reti trascrizionali che controllano il destino gonadico, la meiosi e il mantenimento dell’identità testicolare attraverso la regolazione coordinata di geni di sviluppo a valle. Alterazioni del dosaggio di DMRT1 o un’espressione deregolata sono associate a disturbi dello sviluppo sessuale e a una spermatogenesi compromessa, a conferma della sua sensibilità all’equilibrio della regolazione genica durante la gonadogenesi. Poiché è un regolatore che definisce una specifica linea cellulare, DMRT1 è spesso studiato in modelli di sviluppo riproduttivo, decisioni di destino cellulare e controllo trascrizionale.

DMRT1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DMRT1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DMRT1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DMRT1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DMRT1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.