DLST CRISPR Activationプラスミド (h): sc-409604-ACT

DLST（ジヒドロリポアミドS-スクシニルトランスフェラーゼ）は、TCA回路（クエン酸回路）における重要な酵素ノードであるミトコンドリア2-オキソグルタル酸デヒドロゲナーゼ複合体のE2コア構成要素をコードします。α-ケトグルタル酸からスクシニルCoAを生成する反応を触媒し、リポ酸依存性のアシル基転移を協調することで、DLSTは酸化的代謝、NADH産生、ならびにミトコンドリアのレドックスバランスを支えます。DLSTの機能は、中心炭素代謝をアミノ酸分解代謝およびより広範なミトコンドリア恒常性と結び付けており、これらの過程は代謝ストレスやミトコンドリア機能障害の文脈でしばしば研究されています。DLSTを含むTCA回路構成要素の制御異常は、神経変性疾患や増殖性疾患の生物学で観察される生体エネルギーのリモデリングと関連することが報告されており、機序解明研究における重要性が示唆されています。

DLST CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DLSTの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DLST CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DLST 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDLST転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DLSTの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDLST遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDLST依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDLST発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDLST経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。