DLK2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406327

Übersicht

DLK2 (Delta-like non-canonical Notch ligand 2) kodiert ein transmembranes Protein mit EGF-ähnlichen Wiederholungen, das als atypischer Ligand/Modulator der Notch-Signalübertragung fungiert. In humanen Zellen kann DLK2 Programme der Zell-Zell-Kommunikation beeinflussen, die die Lineage-Festlegung, Differenzierung und Gewebemusterbildung steuern, und dabei mit Signalwegen zusammenwirken, die Vorläuferzustände sowie epitheliale–mesenchymale Dynamiken prägen. Eine veränderte Expression von DLK2 wurde in mehreren Tumorkontexten und in Modellen der Entwicklungsbiologie beschrieben, was die Untersuchung seines Beitrags zur Kontrolle der Proliferation, zu stammzellähnlichen Phänotypen und zur Signalgebung im Mikroumfeld unterstützt. DLK2 ist daher nützlich, um die Regulation nicht-kanonischer Notch-Signalwege und nachgeschaltete transkriptionelle Antworten zu analysieren.

Das DLK2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DLK2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DLK2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DLK2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DLK2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DLK2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DLK2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DLK2-Exone abzielen, die für die DLK2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DLK2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DLK2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom DLK2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DLK2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DLK2 HDR-Plasmid (h) und DLK2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DLK2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DLK2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.