Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Dia 1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401929
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Dia 1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Dia 1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Dia 1 Antibody (E-4): sc-373807
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Dia 1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-401929 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
DIAPH1 (Dia1) codifica una formina responsiva a RhoA che nuclea ed elonga filamenti di actina lineari, coordinando il rimodellamento del citoscheletro necessario per la forma cellulare, l’adesione e la migrazione direzionata. Dia1 interagisce con la segnalazione delle GTPasi Rho e coopera con la profilina e altri regolatori dell’actina per sostenere l’assemblaggio delle fibre di stress, la formazione di filopodi e la citocinesi. Attraverso i suoi effetti sul crosstalk actina–microtubuli e sul traffico di membrana, DIAPH1 contribuisce a processi quali il posizionamento del fuso e la dinamica delle vescicole. Un’attività deregolata di DIAPH1 è stata collegata a un’alterata meccanotrasduzione e ha rilevanza patologica nella perdita uditiva ereditaria e in fenotipi piastrinici/citoscheletrici, rendendolo un bersaglio utile per studi funzionali in sistemi cellulari umani.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Dia 1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DIAPH1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DIAPH1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DIAPH1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Dia 1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DIAPH1 per lo studio della segnalazione di Dia 1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni DIAPH1 critici per la funzione di Dia 1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DIAPH1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Dia 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Dia 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DIAPH1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Dia 1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Dia 1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DIAPH1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DIAPH1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.