Plasmide CRISPR/Cas9 KO DHRS3 (h): sc-411259

Présentation

DHRS3 (déshydrogénase/réductase 3) code une déshydrogénase/réductase à chaîne courte dépendante du NADPH qui catalyse la réduction du rétinaldéhyde en rétinol, contribuant à réguler l’homéostasie intracellulaire des rétinoïdes. En limitant la disponibilité du rétinal pour son oxydation en acide rétinoïque, DHRS3 module les programmes de signalisation de l’acide rétinoïque qui influencent la différenciation, le développement embryonnaire, la biologie épithéliale et l’adaptation métabolique. L’expression de DHRS3 répond aux rétinoïdes et s’intègre aux processus de stockage du rétinol et liés au stress oxydant via le contrôle du flux d’aldéhydes réactifs. Une dérégulation du métabolisme des rétinoïdes et une activité altérée de DHRS3 ont été associées à des anomalies du développement et à des modifications, liées au cancer, des états de différenciation, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des phénotypes induits par les rétinoïdes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DHRS3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DHRS3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DHRS3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DHRS3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DHRS3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DHRS3 pour l'étude de la signalisation de DHRS3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DHRS3 essentiels à la fonction de DHRS3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DHRS3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DHRS3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DHRS3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DHRS3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DHRS3 plasmide HDR (h) et le DHRS3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DHRS3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DHRS3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.