Dhh CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403357-ACT

ヒトDHHは、Hedgehogファミリーに属する分泌性モルフォゲンであるDesert hedgehog（Dhh）をコードしており、正規のPTCH1–SMOシグナル伝達および下流のGLI転写因子を介して、細胞運命の規定や組織パターニングを制御する。Dhhは末梢神経の発生と性腺分化において特に重要で、シュワン細胞系譜の成熟と精巣の体細胞機能を協調的に調節する。DHHの発現変化や経路活性の異常は、性分化疾患や末梢神経障害に関連する表現型と関連づけられており、発生シグナルプログラムを文脈依存的に制御する因子として頻繁に研究されている。リガンド駆動型経路の結節点として、Dhhは幹細胞、オルガノイド、発生モデル系におけるパラクリンコミュニケーション、モルフォゲン勾配、転写応答の解明に有用な解析対象となる。

Dhh CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DHHの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Dhh CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DHH 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDHH転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Dhhの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDHH遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDhh依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDHH発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDhh経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。