Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
DHFR 더블 틈내기효소 플라스미드 (h): sc-416991-NIC
- Target species: human
- 20 µg of transfection-ready, purified plasmid DNA; Suitable for up to 20 transfections
- DHFRL1 Double Nickase Plasmid (h) 는 한쌍의D10A mutated Cas9 nuclease 와 타깃특정 20 nt guide RNA (gRNA)를 인코딩하는 plasmid를 포함하고있으며 gRNA는 대응 CRISPR/Cas9 KO보다 높은 특이성을 띤 knockout gene을 발현하도록 디자인되였습니다.
- 한쌍의 gRNA는 약 20bp가량 떨어져 있으며 이는 게놈DNA의 Cas9-mediated double nicking을 발생하여 DSB를 모방합니다.
- 한쌍의 plasmid 중 하나는 selection에 필요한 puromycin-resistance gene을, 다른하나는 형질주입효율을 확인하는 GFP marker를 보유하고있습니다.
- DHFRL1 더블 니케이스 플라스미드 (h) 및 DHFRL1 더블 니케이스 플라스미드 (h2)는 DHFR2을 표적하는 서로 다른 쌍을 이루는 gRNA 설계를 암호화합니다. 하나 또는 두 가지 디자인 모두 이용 가능할 수 있습니다
주문정보
| 제품명 | 카탈로그 번호 | 단위 | 가격 | 수량 | 관심품목 | |
DHFR 더블 틈내기효소 플라스미드 (h) | sc-416991-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DHFRL1 더블 틈내기효소 플라스미드 (h2) | sc-416991-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
인간 DHFR2는 NADPH 의존성 효소인 디하이드로폴레이트 환원효소(DHFR)를 암호화하며, 디하이드로폴레이트를 테트라하이드로폴레이트로 환원시키는 반응을 촉매해 de novo 티미딜레이트 및 퓨린 생합성에 필요한 1-탄소 대사를 유지합니다. 엽산 순환에서의 역할을 통해 DHFR은 메티오닌/S-아데노실메티오닌 대사와의 연결을 바탕으로 DNA 복제 및 수선, 세포주기 진행, 그리고 세포의 메틸화 능력을 뒷받침합니다. DHFR 활성의 교란은 뉴클레오타이드 풀 균형과 유전체 안정성에 영향을 주며, 이러한 과정은 증식 스트레스 및 대사 재편성 맥락에서 자주 연구됩니다. 따라서 DHFR 생물학은 엽산 의존적 생합성 경로와 뉴클레오타이드 고갈 및 복제 스트레스에 대한 세포 반응을 연구하는 데 널리 활용됩니다.
DHFRL1 더블 니카제 플라스미드(h)는 human 세포주 내 DHFR2 유전자좌의 고특이성 편집을 위해 설계된 쌍을 이루는 플라스미드로 구성됩니다. 각 플라스미드는 Cas9 D10A 니카아제와 DHFR2 내의 반대 DNA 가닥을 표적으로 하는 고유한 sgRNA를 발현합니다. 반대 DNA 가닥의 인접 부위로 유도될 때, 두 니카아제는 서로 어긋난 단일 가닥 절단 부위를 생성하며, 이는 함께 엇갈린 이중 가닥 절단을 유발하여 두 가이드의 조화된 표적 활성을 필요로 합니다. 이렇게 생성된 DNA 절단은 내인성 세포 복구 경로, 특히 비동형 말단 결합(NHEJ)을 통해 해결되며, 이는 DHFR2의 기능을 방해하는 삽입 또는 결실을 초래한다. 표적 부위에서 이중 sgRNA 결합을 요구함으로써, 이중 니킹 접근법은 편집 특이성을 향상시키고 표적 정밀도에 대한 추가적인 제어가 필요한 응용을 위한 보완적인 CRISPR 전략을 제공한다.
편집된 세포를 효율적으로 식별할 수 있도록, 한 플라스미드는 형광 시각화를 위한 GFP를 발현하며, 다른 플라스미드는 항생제 선별을 위한 푸로마이신 내성 유전자를 포함하고 있습니다. 이러한 기능들은 공동 형질 도입된 세포 집단의 효율적인 농축을 지원하며, DHFR2 기능이 손상된 클론의 검증을 단순화합니다.
연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.