Plasmide Double Nickase (h) Desmin: sc-400248-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Desmin correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Desmin Double Nickase (h) et le plasmide Desmin Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DES. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Desmin Antibody (RD301): sc-23879
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Desmin | sc-400248-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Desmin | sc-400248-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DES code la desmine, une protéine de filament intermédiaire de type III qui constitue un échafaudage essentiel reliant les disques Z, le sarcolemme, les mitochondries et les noyaux dans les muscles striés et lisses. La desmine intègre l’architecture du cytosquelette à la mécanotransduction, au positionnement des organites et aux réponses au stress cellulaire, soutenant l’alignement des myofibrilles et la fonction contractile. Elle participe à l’assemblage des filaments intermédiaires et au dialogue avec les réseaux d’actine et de microtubules, influençant la différenciation des cellules musculaires et le remodelage structural. Des variants pathogènes de DES et une organisation altérée de la desmine sont associés à des myopathies et des cardiomyopathies liées à la desmine, caractérisées par des agrégats cytoplasmiques de desmine et une intégrité musculaire compromise, faisant de DES un locus clé pour l’étude des mécanismes de dégénérescence musculaire.
Desmin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DES dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DES. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DES. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DES.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.