Dermokine Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406705

Descripción general

DMKN codifica la dermoquina, una proteína secretada que se expresa predominantemente en epitelios estratificados, donde contribuye a la diferenciación epidérmica, el mantenimiento de la barrera y la homeostasis tisular. La dermoquina se asocia con programas de maduración de los queratinocitos y con la señalización extracelular, que puede influir en señales inflamatorias y en las interacciones epitelio–estroma. Se han descrito alteraciones en la expresión de DMKN en trastornos cutáneos y en cánceres epiteliales, lo que respalda su relevancia para estudios sobre disfunción de la barrera, diferenciación desregulada y remodelación del microambiente asociada a tumores. Como factor enriquecido en piel, DMKN se examina con frecuencia en flujos de trabajo transcriptómicos y proteómicos que vinculan transiciones del estado epitelial con señalización asociada a la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Dermokine (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DMKN en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DMKN junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DMKN tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Dermokine.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DMKN para la investigación de la señalización de Dermokine, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DMKN críticos para la función de Dermokine
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DMKN para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Dermokine CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Dermokine CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DMKN. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Dermokine (h) y el plásmido HDR Dermokine (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DMKN para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DMKN definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.