Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Delta Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400790
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Delta Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Delta, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Delta Antibody (G-1): sc-377310
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Delta Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-400790 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
DLL1 codifica il ligando umano Delta-like 1 (Delta), un attivatore dei recettori Notch ancorato alla membrana che media la segnalazione juxtacrina per controllare le decisioni di destino cellulare, la definizione dei pattern tissutali e il mantenimento di cellule staminali/progenitrici. L’interazione DLL1–NOTCH innesca il rilascio proteolitico del dominio intracellulare di Notch e programmi trascrizionali mediati da RBPJ/CSL che influenzano differenziamento, proliferazione e apoptosi. Questa via si interseca con programmi di sviluppo e segnali del microambiente, e la sua disregolazione è spesso studiata in contesti quali la biologia dei tumori, la neurogenesi e lo sviluppo delle cellule immunitarie. L’espressione di DLL1 e le dinamiche della sua segnalazione sono inoltre rilevanti per le transizioni epitelio-mesenchimali e per la regolazione dell’angiogenesi, attraverso un bilanciamento coordinato tra ligandi e recettori Notch.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Delta (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DLL1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DLL1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DLL1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Delta.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DLL1 per lo studio della segnalazione di Delta, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni DLL1 critici per la funzione di Delta
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DLL1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Delta CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Delta CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DLL1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Delta Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Delta (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DLL1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DLL1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.