DDX46 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407298

概要

DDX46はATP依存性RNAヘリカーゼをコードしており、スプライソソーム内のU5 snRNPの中核構成要素として機能し、pre-mRNAスプライシングおよびスプライス部位の忠実性を支えます。スプライソソームの組み立てや触媒活性化の過程でRNA–タンパク質複合体を再構築することにより、DDX46は転写産物の成熟、選択的スプライシングプログラム、ならびに下流のプロテオーム構成に影響を与えます。スプライソソームのヘリカーゼ活性が撹乱されると、細胞周期の進行、DNA損傷応答、ストレス適応的な転写出力を制御するRNAプロセシングネットワークが変化し得ます。U5関連因子を含むスプライシング機構の破綻は、がんにおけるトランスクリプトームの再配線や、神経発生・神経変性疾患の機序に広く関与していることから、DDX46はRNA生物学研究における有用な結節点となります。

DDX46 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDDX46遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DDX46内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DDX46のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DDX46タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DDX46シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DDX46欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DDX46の機能に不可欠なDDX46エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DDX46ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DDX46 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDDX46 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DDX46遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DDX46 HDRプラスミド（h）および DDX46 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDDX46ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDDX46標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。