Particules Lentivirales d'Activation (h) DDX3X: sc-401253-LAC

DDX3X code une hélicase ARN de type DEAD-box, ATP-dépendante, qui coordonne plusieurs étapes du métabolisme de l’ARN, notamment l’export des ARNm, l’initiation de la traduction et la dynamique des granules d’ARN en situation de stress cellulaire. Grâce à ses interactions avec des complexes ribonucléoprotéiques et des intermédiaires de signalisation, DDX3X relie la régulation post-transcriptionnelle à des voies contrôlant la progression du cycle cellulaire, la détection immunitaire innée et les réponses au stress. Une activité altérée de DDX3X a été associée à une perturbation de l’homéostasie de l’ARN et à une régulation aberrante des programmes de prolifération et de différenciation, ce qui en fait une cible d’intérêt pour l’étude du neurodéveloppement, des interactions virus–facteur de l’hôte et du remodelage du transcriptome lié au cancer. Dans les cellules humaines, DDX3X constitue un nœud clé pour analyser comment la fonction des hélicases ARN façonne les profils d’expression génique en conditions basales et en conditions de stress.

Les particules d'activation lentivirales DDX3X (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de DDX3X dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales DDX3X (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription DDX3X, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de DDX3X. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif DDX3X ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.