DDX32 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-430371

Visão geral

Dhx32 codifica a proteína murina DDX32, uma putativa helicase de RNA dependente de ATP da família DEAD-box, implicada na remodelação, impulsionada por ATP, da estrutura secundária do RNA e de complexos ribonucleoproteicos. Proteínas dessa classe comumente regulam processos centrais do metabolismo de RNA, incluindo o splicing de pré‑mRNA, o transporte de RNA, a biogênese de ribossomos e a tradução, vinculando a atividade de DDX32 ao controle de programas de expressão gênica. Alterações na função de helicases de RNA podem perturbar a regulação do ciclo celular, a diferenciação e respostas transcricionais adaptativas ao estresse, tornando Dhx32 um locus útil para o estudo de vias de processamento de RNA no desenvolvimento e em fenótipos celulares relevantes para doenças. Em sistemas murinos, a investigação de Dhx32 dá suporte a estudos mecanísticos que conectam o metabolismo de RNA a redes de sinalização e a relações genótipo–fenótipo.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO DDX32 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Dhx32 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Dhx32, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Dhx32 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína DDX32.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Dhx32 para a investigação da sinalização de DDX32, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Dhx32 críticos para a função DDX32
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Dhx32 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo DDX32 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo DDX32 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Dhx32. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo DDX32 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR DDX32 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Dhx32 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Dhx32 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.